Интернет-журнал 'Домашняя лаборатория', 2007 №2 - Журнал «Домашняя лаборатория»

class="p1">• И, наконец, создать среду и условия, в которых грибной организм начнет плодоношение.

Ваша культура должна пройти через три отдельные фазы (См. Рис. 1):

1. Стерильная культура на агаровой среде

2. Стерильная культура на зерне, известная также как "зерновой мицелий"

3. Плодоношение на пастеризованном субстрате

Пусть слово "стерильность", наряду с новыми терминами, не смущает и не останавливает вас. Да, потенциальные источники заражения существуют повсеместно в окружающей среде: в наших домах, даже в чистых комнатах и лабораториях. Цель состоит в том, чтобы предотвратить их попадание в разводимую культуру и исключить "борьбу" за питательную среду, оставив исключительной право ее использования нашим грибным культурам. Обладая определенной аккуратностью и после небольшой тренировки с использованием простых методик, этот процесс может быть успешно освоен каждым. В общем, дышите глубже и читайте о деталях процесса дальше, шаг за шагом.

Рис. 1 — Это действительно просто!

(Рисунки выполнены Т. Beausejour)

Комментарий к тексту на рисунке (по часовой стрелке): Sterile Tissue Culture — стерильная ткань гриба, Inoculation in Grain — инокуляция зерна, Incubation of Spawn — рост зернового мицелия,Transfer to Final Substrate — перенос на основной субстрат, Mushrooms Fruiting in Substrate — плодоношение грибов на субстрате.

Шаг 1: Подготовка агара и стерильной культуры

Подготовка агара: Первым шагом является подготовка агаровой питательной среды. Произведенный из морских водорослей агар, в совокупности с добавочными ингредиентами, часто используется для первоначального разведения и дальнейшей изоляции культур (Прим. ред.: Кроме того агар используется в юго-восточных кулинариях и производстве некоторых конфет и мармеладов). Микробиологи приспосабливают агаровую среду для селекционного выращивания грибов путем добавления различных питательных веществ, таких как минералы, антибиотиков и т. д. Агаровая среда обладает и тем ценным качеством, что микроорганизмы, вызывающие заражение, без труда обнаруживаются на поверхности среды и таким образом, они могут быть уничтожены на самых ранних стадиях процесса роста.

Для разведения грибного мицелия могут быть использованы несколько типов агаровых сред. Наиболее часто используют картофельный агар (Potato Dextrose Agar, PDA) и мальтодекстриновый агар (Malt Dextrose Agar, MDA). Готовые смеси промышленного изготовления доступны в самых различных магазинах. Правда, они могут оказаться несколько дороже, чем при самостоятельном приготовлении агара, но если позволяют средства и не хочется тратить драгоценное время, то готовые смеси — это хороший выбор.

Для тех, кто привык все делать своими руками, ниже приводятся два способа приготовления картофельного агара (PDA). Первый способ, уже не раз мною опробованный, основан на методике, описанной в издании The Mushroom Cultivator ("Грибовод"), авторы Paul Stamets и J.S. Chilton. Второй способ с успехом используется и пропагандируется грибоводн и ческой группой MSSF. Попробуйте первый или второй способ, или же оцените оба. Вскоре вы сможете определиться, какой из способов лучше подходит для вас, а может быть, на основе полученного опыта вы придумаете свой способ, который со временем несомненно преобразуется во что-то еще. Процедура приготовления выглядит так же, как описание рецепта из поваренной книги.

Материалы, необходимые для обоих методов

• Хлопчатобумажный бинт (продается в аптеках)

• Алюминиевая фольга

• Пробирки с накручиваемыми колпачками для автоклавной обработки — можно найти у снабженцев по медицинскому оборудованию или попросить в лаборатории. Лаборатории иногда избавляются от больших количеств таких пробирок. Поищите, поспрашивайте (Прим. ред.: можно использовать обычные пробирки, желательно большого объема, с ватными пробками. Пробки изготовляются из плотноскатанной ваты и обтягиваются марлей. При стерилизации, чтобы пробки не отсыревали, их оборачивают плотной бумагой или фольгой).

• Небольшая воронка для заполнения пробирок

• Мерные чашки

• Скороварка

• Две литровые бутылки или колбы с узким горлышком.

Первым делом, несколько слов о скороварке. Скороварка — это, возможно, наиболее дорогостоящая вещь из всего инвентаря грибовода. Если она у вас уже имеется и ее размеры позволяют разместить внутри бутылки или банки, то можно считать, что вы полностью укомплектованы. Если нет, то новая скороварка обойдется вам приблизительно в $75 — $250, в зависимости от размера и места покупки. Скороварки продаются во многих хозяйственных магазинах, торгующих кухонной утварью.

Если у вас сложности с бюджетом, можно пойти по экономному пути и поискать скороварку на распродажах или на барахолке. Можно найти практически новую скороварку за $15–35. Постарайтесь найти скороварку с манометром, а не просто с клапаном-колпачком и без указателя давления. В любом случае, какую бы скороварку вы ни выбрали, очень важно соблюдать все правила безопасной эксплуатации, определенные производителем.

Картофельный агар. Метод № 1

(Для приготовления приблизительно 1 литра среды)

Необходимые материалы:

• 300 грамм картофеля

• 20 грамм агара (поищите в организациях по снабжению медицинских лабораторий, магазинах здорового питания или на азиатских продовольственных рынках)

• 10 грамм декстрозы или другого сахара

• 2 грамма пивных дрожжей (необязательно)

Сварите картофель в 1 литре воды в течение 1 часа. Откиньте картофель, сохранив отвар. Разомните картофель, добавьте масла, соли и перца и съешьте. Сметана, лучок и другие приправы — по вкусу:).

После того, как мы заморили червячка картофельным пюре, возьмем картофельный отвар, агар, сахар, дрожжи (необязательно) и хорошенько все смешаем в кастрюле. Для этой цели хорошо подходит веничек для взбивания, но взбивать не следует, нужно просто перемешивать.

Наполните полученной смесью бутылки или колбы. Заполняйте емкости только на половину или три четверти объема. Закройте горлышки бутылок или колб хлопчатобумажными тампонами и оберните алюминиевой фольгой. Залейте в скороварку воду, чтобы она закрывала дно слоем в 1.5 см., поместите внутрь скороварки сетку, на которую поставьте бутылки или колбы. Поставьте на скороварку крышку и защелкните ее должным образом. Включите плиту и подождите, пока из скороварки не пойдет пар.

После вентиляции в течение нескольких минут, закройте клапан (в соответствии с инструкцией к конкретной скороварке).

Кипятите бутылки под давлением 1 атм. (121 градус по Цельсию) в течение 15 минут. Не позволяйте температуре подниматься выше 121 градуса даже на самое короткое время, иначе произойдет карамелизация среды и она придет в негодность.

Через 15 минут выключите газ и дайте скороварке медленно остыть (в течение примерно 45 минут). Тем временем, снимите с пробирок колпачки, установите пробирки на штативе или в чистых консервных банках и поставьте штатив или консервные банки на чистую рабочую поверхность в месте, свободном от пыли. Когда бутылки с питательной средой остынут и их можно будет брать с помощью чистого полотенца или варежек для микроволновой печи, извлеките их из скороварки и перенесите к пробиркам. Круговыми движениями слегка перемешайте питательную среду, а затем удалите фольгу и хлопчатобумажные тампоны. Используя воронку, заполните пробирки примерно на одну треть.

Наверните