Медицинская микробиология, иммунология и вирусология - Сергей Бабичев

Иммунитет после перенесенного заболевания имеет клеточный (Т-киллеры, макрофаги) и гуморальный характер (IgM и IgG), непрочный. При заболевании наблюдается аллергизация организма.

Лабораторная диагностика. Основу диагностики листериоза составляют бактериологический, серологический методы и реакция иммунофлуоресценции.

Материалом для исследования являются слизь из зева, кровь, пунктат из лимфатического узла, гнойное отделяемое глаз, ликвор, секционный материал. Выделение чистой культуры проводят на простых питательных средах (МПА с 0,05 % теллурита калия или МПБ с 1 – 5 мкг/мл полимиксина). Если материал сильно загрязнен посторонней микрофлорой, сначала заражают белых мышей или морских свинок, а затем после их гибели из внутренних органов (печень, селезенка) делают посевы. Листерии легче выделяются, если до посева исследуемый материал хранится несколько недель при температуре 4 °C. Идентификацию свежевыделенной культуры осуществляют на основании совокупности следующих признаков: бактерии в виде коротких грамположительных палочек, подвижны; ферментируют углеводы с образованием кислоты; положительная проба на каталазу и другие типичные биохимические тесты; положительная конъюнктивальная проба на морской свинке; агглютинация специфической сывороткой.

Для серологической диагностики используют реакции агглютинации, РПГА, РСК, которые становятся положительными со 2-й нед. заболевания. При низком титре антител реакцию следует повторить для установления нарастания их титра. При постановке реакции агглютинации следует предварительно сыворотку больного истощить культурами стафилококков и стрептококков (энтерококков) для адсорбции перекрестно реагирующих антител.

Для диагностики листериоза может использоваться аллергическая проба со стандартным корпускулярным антигеном или антигеном, полученным путем кислотного гидролиза. Внутрикожно вводят 0,1 мл антигена, результат учитывают через 24 – 48 ч; в основе пробы лежит ГЧЗ. Эта проба обычно ставится больным со слабоположительными серологическими реакциями.

Специфическая профилактика и лечение. Специфическая профилактика не разработана. Общая профилактика включает: раннее выявление, изоляцию и лечение больных листериозом домашних животных, захоронение их трупов; дезинфекцию и дератизацию в очаге; соблюдение правил личной гигиены, особенно людьми, работающими в животноводстве и пищевой промышленности; употребление только кипяченого молока, а мяса – после тщательной термической обработки; раннюю диагностику листериоза у беременных и полноценное их лечение. Для лечения используют антибиотики широкого спектра действия (тетрациклин, эритромицин, левомицетин) при всех клинических формах. При листериозном менингите и для лечения беременных и новорожденных хороший эффект дает применение антибиотиков пенициллинового ряда.

Легионеллы

Заслуга выделения возбудителя болезни легионеров (легионеллеза) и доказательства его этиологической роли принадлежит сотрудникам Центра по контролю заболеваемости в г. Атланта (США) Дж. Мак-Дейду и С. Шепарду, которым в 1977 г. удалось из легочной ткани умерших от специфической пневмонии людей выделить неизвестный ранее микроб. Открытие нового широко распространенного инфекционного заболевания и еще не известного науке возбудителя само по себе является фактом в достаточной мере сенсационным. Легионеллы отнесены к классу Gammaproteobacteria, выделены в семейство Legionellaceae с двумя родами – Legionella и Tatlockia. В роде Legionella известно около 40 видов, разделенных более чем на 60 серологических групп. Они различаются по пигментообразованию, способности размножаться в определенных питательных средах, продуцировать β-лактамазу, вызывать аутофлуоресценцию, по наличию оксидазы.

Легионеллез – острое инфекционное заболевание, проявляющееся интоксикацией, лихорадкой, пневмонией, а также поражением дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, почек и центральной нервной системы.

Возбудитель легионеллеза – Legionella pneumophilia – грамотрицательная палочка размерами 0,3 – 0,4 × 2 – 3 мкм, иногда до 8 – 20 и даже до 50 мкм. Имеются липидные включения. Характерной особенностью легионелл является резко выраженная в ряде случаев заостренность концов их клеток. Они подвижны, несколько жгутиков располагаются полярно, биполярно или перитрихиально; спор и капсул не образуют, склонны к полиморфизму, иногда красятся грамположительно. Размер геномной ДНК легионелл составляет 2,5 · 103 МД, содержание Г + Ц составляет 39 мол %. Легионеллы – факультативные внутриклеточные паразиты.

Условия культивирования легионелл имеют ряд особенностей. На простых средах они не растут, требуют создания специальных условий. Их можно культивировать на средах с добавлением биологических жидкостей, гемоглобина, пирофосфата железа, изовиталекса; лучше растут в присутствии 5 % СО2; температурные границы роста 25 – 42 °C, оптимальная температура 35 – 37 °C. Видимые колонии на плотной питательной среде вырастают на 3-и сут., достигают диаметра 3 – 4 мм на 5 – 7-е сут. инкубации при 35 °C. Колонии округлые, выпуклые, сероватого оттенка, блестящие, имеют ровные края. На 4-е сут. колонии легионелл могут иметь пигмент коричневого цвета. Для культивирования легионелл может быть использовано заражение куриных эмбрионов, морских свинок и культур клеток.

Из биохимических свойств легионелл следует отметить способность продуцировать оксидазу, каталазу, ферментировать крахмал, а также гидролизовать желатин и гиппурат натрия. В то же время легионеллы не способны продуцировать уреазу, восстанавливать нитраты в нитриты, ферментировать другие углеводы.

Исследования химического состава легионелл показали ряд особенностей: в клеточной стенке разных штаммов преобладают жирные кислоты с разветвленными цепями, что характерно больше для грамположительных бактерий; и в большом количестве содержится диаминопимелиновая кислота.

Антигенная структура. У легионелл установлено наличие типо– и группоспецифических антигенов. Серогруппы определяют с помощью реакции прямой иммунофлуоресценции.

Факторы патогенности легионелл изучены сравнительно мало. Важнейшими из них являются липополисахаридный эндотоксин, несколько экзоферментов (протеазы), гемолизины, а также токсины. Один из них нарушает окислительные процессы, протекающие в полиморфно-ядерных лейкоцитах при фагоцитозе, летален для куриных эмбрионов, проявляет цитотоксическое действие в разных культурах клеток. Этот токсин представляет собой термостабильный пептид (ТС-токсин) с молекулярной массой 1,3 кД, состоящий из 6 аминокислотных остатков. Обнаружен также термолабильный цитотоксин (ТЛ-токсин), являющийся высокомолекулярным белком, теряющим свои токсические свойства при нагревании до 60 °C. Продукция этого токсина зависит от фазы роста бактериальной популяции, рН среды, температуры и ряда других условий.

Возбудитель вызывает быструю гибель макрофагов, давая основание полагать, что причина ее – не размножение возбудителя в макрофагах, а выход внутриклеточного токсина при разрушении бактериальных клеток. Наличие у легионелл внутриклеточной токсической активности подтверждается результатами, полученными при действии фильтрата разрушенных клеток вирулентной культуры на монослой макрофагов и при заражении им белых мышей.

Длительное инкубирование легионелл на искусственных питательных средах приводит к резкому снижению вирулентности культуры. Штамм, утративший свою вирулентность, может восстановить ее при переменном пассировании через куриные эмбрионы и организм морской свинки. Умеренная вирулентность сохраняется при постоянном пассировании легионелл на куриных эмбрионах.

Эпидемиология. Места естественного обитания легионелл – открытые водоемы. Источник инфекции – вода систем кондиционирования воздуха рециркуляторного типа, душевые установки, ванны для бальнеопроцедур и т. п. Механизм передачи – аспираторный. Большинство вспышек связано с замкнутыми системами охлаждения воды и технологическими циклами, при функционировании которых образуется высокодисперсный аэрозоль, содержащий легионеллы. Заражение возможно при участии в земляных работах. При групповых и спорадических случаях заболевания источником распространения возбудителя могут быть душевые установки, бытовые увлажнители воздуха, медицинское и лабораторное оборудование. Установлен факт внутриклеточного развития легионелл в амебах, обитающих в открытых водоемах и почве, в одной амебе может находиться более 1000 микробных клеток. Благоприятные условия для жизни и размножения легионелл обнаружены в открытых теплых водоемах с сине-зелеными водорослями, показана зависимость их роста от фотосинтетической активности водорослей. К инфекции восприимчивы все возрастные группы населения. Заболевают чаще люди, занятые земляными работами, а также лица, находившиеся в помещениях, где действуют системы кондиционирования воздуха или имеются устройства с указанными выше источниками инфекции. Для эпидемических вспышек характерна сезонность (июль, август, сентябрь), спорадические случаи регистрируются в течение всего года, но чаще летом. Из животных к возбудителю чувствительны крысы, сирийские хомячки, кролики, морские свинки. Наличие антител в сыворотках крови домашних животных и обезьян говорит также о возможном заражении их в естественных условиях.